Дом в Лаврушинском переулке семья Третьяковых купила в 1851 году. Но история этого владения прослеживается еще с конца XVII столетия. Уже тогда здесь были возведены каменные палаты, которые перестраивались на протяжении последующих веков, в том числе и во второй половине XVIII века при Кологривовых – тогдашних владельцах. Следующая перестройка была осуществлена купцами Шестовыми в 1835-1839 годах.

В 1856 году П. М. Третьяков приобрел первые две картины русских художников – полотно Василия Худякова «Стычка с финляндскими контрабандистами» и «Искушение» Николая Шильдера, – которые и положили начало его знаменитому собранию. Через некоторое время места для постоянно пополнявшейся коллекции стало не хватать, и в 1872 году Павел Михайлович пристроил к юго-западному углу главного дома дополнительный корпус, где и разместил свою галерею. По мере роста собрания, в 1880-е годы, по проекту архитектора А. С. Каминского, «семейного» зодчего Третьяковых (Александр Степанович был женат на дочери Сергея Михайловича Третьякова), в целях расширения экспозиционных площадей, было возведено еще несколько строений, в том числе и по Малому Толмачевскому переулку. Тогда же выстроена новая ограда с парадным входом со стороны Лаврушинского переулка.

В 1892 году П. М. Третьяков передал свою коллекцию, включавшую к тому времени 1287 картин, 518 рисунков и 9 скульптур русских художников XVIII-XIX веков, а также 75 картин, принадлежавших его недавно скончавшемуся брату Сергею Михайловичу, в дар городу Москве. Сам же Павел Михайлович стал пожизненным попечителем галереи. Уже после его смерти в 1899-1900 годах жилой дом Третьякова был перестроен и приспособлен под нужды галереи. А еще через два года строения по Лаврушинскому переулку были объединены новым фасадом по проекту художника В. М. Васнецова, именно тогда и появился знакомый всем облик Третьяковской галереи.

В 1913 году попечителем галереи был назначен И. Э. Грабарь, ставший после революции ее директором. В 1920-х– начале 1930-х годов к «Третьяковке» присоединили несколько соседних владений, в том числе и закрытую к тому времени церковь Святителя Николая в Толмачах. В 1936 году по проекту архитектора А. В. Щусева возведен дополнительный двухэтажный корпус с северной стороны от главного здания, залы которого вскоре были включены в основной маршрут экспозиции.

В годы Великой Отечественной войны экспонаты Третьяковской галереи были эвакуированы в Новосибирск и Пермь. Само же здание пострадало во время вражеских налетов. Но уже к 1944 году большая часть залов была отремонтирована.

В середине 1980-х годов начались работы, связанные со строительством депозитария и нового, к сожалению, крайне неудачного с архитектурной точки зрения, музейного корпуса на углу с Большим Толмачевским переулком. Одновременно реконструирован и основной корпус с сохранением его исторического облика. Все работы завершились к 1995 году. В общий музейный ансамбль была включена и церковь Николы Чудотворца в Толмачах – в настоящее время она является домовым храмом-музеем Третьяковской галереи. Здесь, в частности, находится одна из самых чтимых реликвий Русской Церкви – чудотворная Владимирская икона Божьей Матери.

В настоящее время собрание галереи насчитывает свыше 170 тысяч произведений искусства. И это не только один из известнейших мировых музеев, но и крупный научный и реставрационный центр.